Алгоритм отбора образцов для гено- и субтипирования вируса гепатита В с помощью панели моноклональных антител в иммуноферментном анализе

Введение. Ранее была описана отечественная методика определения генотипов вируса гепатита В (ВГВ) и субтипов поверхностного антигенаВГВ (HBsAg) в HBsAg-положительных образцах сыворотки крови с панелью моноклональных антител (МАТ) методом иммуноферментногоанализа (ИФА). В рутинной лабораторной практике результаты выявления HBsAg получают в единицах оптической плотности (ОП).

Цель работы. Описать алгоритм отбора образцов для иммуноферментного гено- и субтипирования ВГВ с панелью МАТ.Материалы и методы. В работе исследовали 40 образцов сыворотки крови с положительными результатами определения HBsAg. Генотипы ВГВи субтипы HBsAg устанавливали с помощью четырех различных конъюгатов МАТ с пероксидазой хрена по методике ИФА, описанной ранее.

Результаты и обсуждение. В образцах с ОП менее 2,0 о. е. и подтверждением наличия HBsAg после единственного подтверждающегоисследования (n = 19) генотипы ВГВ / субтипы HBsAg не установлены. В образцах с ОП выше 2,0 о. е. и верификацией наличия антигена пристандартном режиме регистрации (n = 15) иммуноферментное гено- и субтипирование ВГВ оказалось эффективным в 27 % случаев (4/15); для образцов с верификацией HBsAg, проведенной при вспомогательном измерении (n = 6), эффективность методики составила 100 %. С помощью панели МАТ в ИФА изучены характеристики ВГВ 10 образцов с наличием HBsAg: генотип D ВГВ (n = 10), субтипы ayw2 (n = 7), ayw3 (n = 3).

Выводы. Для наиболее эффективного применения методики гено- и субтипирования ВГВ с помощью панели МАТ в ИФА следуетиспользовать образцы HBsAg+ с ОП более 2,0 о. е. в скрининге и верификацией наличия антигена при вспомогательном режимерегистрации результатов.

1. Kramvis A. Genotypes and genetic variability of hepatitis B virus. Intervirology. 2014; 57 (3–4): 141–150. https://doi.org/10.1159/000360947

2. Lin C–L, Kao J-H. Hepatitis B virus genotypes and variants. Cold Spring Harbor Perspectives in Medicine. 2015; 5 (5): a021436. https://doi.org/10.1101/cshperspect.a021436

3. Liu Z, Zhang Y, Xu M, Li X, Zhang Z. Distribution of hepatitis B virus genotypes and subgenotypes: A meta-analysis. Medicine (Baltimore). 2021; 100 (50): e27941. https://doi.org/10.1097/MD.0000000000027941

4. Couroucé-Pauty A.M., Plançon A., Soulier J.P. Distribution of HBsAg subtypes in the world. Vox Sanguins. 1983; 44 (4): 197–211. https://doi.org/10.1111/j.1423–0410.1983.tb01885.x

5. Magnius LO, Norder H. Subtypes, Genotypes and Molecular Epidemiology of the Hepatitis B Virus as Reflected by Sequence Variability of the S-Gene. Intervirology. 1995; 38: 24–34. https://doi.org/10.1159/000150411

6. Valsamakis A. Molecular testing in the diagnosis and management of chronic hepatitis B. Clin Microbiol Rev. 2007; 20 (3): 426–39. https://doi.org/10.1128/CMR.00009–07

7. Безуглова Л.В., Мануйлов В.А., Осипова Л.П., Мосина Я.Д., Порываева В.А., Агафонова О.А., Могильных А.К., Нетесов С.В., Нетесова И. Г. Результаты испытаний реагентов для иммуноферментного определения субтипа HBsAg и генотипа вируса гепатита B в образцах плазмы крови человека. Молекулярная генетика, микробиология и вирусология. 2020; 38 (4): 188–195. https://doi.org/10.17116/molgen2020380411884

8. Безуглова Л.В., Исаева О.В., Карлсен А.А., Ильченко Л.Ю., Слепцова С.С., Сарыглар А.А., Порываева В.А., Мосина Я.Д., Агафонова О.А., Могильных А.К., Кюрегян К.К., Михайлов М.И., Нетесов С.В., Нетесова И.Г. Генотипы вируса гепатита В у пациентов с гепатитом D, определенные с помощью панели моноклональных антител собственной разработки. Молекулярная генетика, микробиология и вирусология. 2022; 40 (2): 43–50. https://doi.org/10.17116/molgen20224002143

9. О применении в практике здравоохранения иммуноферментных тест-систем для выявления поверхностного антигена вируса гепатита В (HBsAg) и антител к вирусу гепатита С (анти-ВГС) в сыворотке крови человека. Приказ министерства здравоохранения РФ № 322 от 21 октября 2002 года. Ссылка активна на 13.07.22. https://docs.cntd.ru/document/901832500

10. Нетесова И. Г., Ярославцева О. А., Цой Л. В., Жуков В. А., Нетесов С. В. Результаты участия 360 лабораторий России в Программе внешней оценки качества исследований HBsAg. Клин. Лаб. Диагн. 2007; 3: 47–49.

11. Шульгина М.М., Ермолаева М.И., Ефремова Е.В., Потапова А.А. Проблемы массового скрининга HBsAg и пути их решения. Медицинский алфавит. 2018; 1 (5): 26–30.

12. Tallo T, Tefanova V, Priimagi L, Schmidt J, Katargina O, Michailov M. et al. D2: Major subgenotype of hepatitis B virus in Russia and the Baltic region. J General Virology. 2008; 89: 1829–1839. https://doi.org/10.1099/vir.0.83660–0

13. Olinger CM, Lazouskaya NV, Eremin VF, Muller CP. Multiple genotypes and subtypes of hepatitis B and C viruses in Belarus: similarities with Russia and western European influences. Clinical Microbiology and Infection. 2008; 14 (6): 575–581. https://doi.org/10.1111/j.1469–0691.2008.01988.x

14. Мануйлов В.А., Осипова Л.П., Нетесова И.Г., Чуб Е.В., Безуглова Л.В., Norder H. и др. Распространенность различных генотипов и субтипов HBs-антигена вируса гепатита B в группах коренного населения Сибири. Молекулярная генетика, микробиология и вирусология. 2015; 1: 28–35. https://doi.org/10.3103/S089141681501005X

15. Сероварианты HBsAg и эволюция тестов для его выявления. https://www.fedlab.ru/upload/medialibrary/3e9/mostovich-la-_-serovarianty-hbsag-.-22-okt-2015-khmao.pdf. Ссылка активна на13.07.2022.