Актуальные вопросы стандартизации исследования антинуклеарных антител методом непрямой иммунофлюоресценции на HEp-2 – клетках

Введение. Антинуклеарные антитела (АНА) – гетерогенная группа органонеспецифических аутоантител к различным компонентам клеточного ядра и цитоплазмы. Исследование АНА в сыворотке крови с помощью непрямой реакции иммунофлюоресценции на HEp-2 клетках (НРИФ-HEp-2) служит эталонным скрининговым тестом для диагностики системных аутоиммунных ревматических заболеваний, лекарственной волчанки, аутоиммунных заболеваний печени, ювенильного хронического артрита. В повседневной клинико-лабораторной практике остаются нерешенными вопросы стандартизации НРИФ-HEp-2, связанные с разработкой унифицированной формы отчета о результатах определения АНА данным методом, в том числе касающиеся оценки скрининговых и конечных титров АНА, кодировки типов свечения, порядка выполнения подтверждающих тестов. Цель исследования. Разработать стандартную форму отчета о результатах исследования АНА методом НРИФ-HЕp-2.

Материал и методы. Анкетирование 10 иммунологических и клинико-диагностических лабораторий с использованием опросника ICAP, адаптированного рабочей группой по стандартизации определения АНА методом НРИФ-HЕp-2 комитета по иммунологии ассоциации специалистов и организаций лабораторной службы «Федерация лабораторной медицины».

Результаты. Согласно результатам анкетирования 10 отечественных иммунологических и клинико-диагностических лабораторий по девяти актуальным вопросам, касающимся стандартизации отчета о результатах исследования АНА методом НРИФ-HЕp-2, большинство участников опроса: используют скрининговое разведение сыворотки 1:160; указывают максимальный конечный титр АНФ; учитывают цитоплазматические типы свечения в качестве положительных или отрицательных результатов определения АНА в НРИФ-HEp-2; идентифицируют типы свечения, включая использование АС-кодировки; считают обязательным проведение подтверждающих тестов для выявления АНА к отдельным ядерным антигенам у АНФ-положительных пациентов, но не представляют перечень данных исследований в бланке выдачи результатов; регистрируют титры АНФ для каждого из обнаруженных типов свечения отдельно; обозначают титры АНФ с помощью двоеточия; не дают клинической интерпретации полученных данных. На основе межлабораторного консенсуса с учетом рекомендаций ICAP и требований ГОСТ Р ИСО 15189–2015 разработана модель унифицированного отчета о результатах исследования АНА методом НРИФ-HЕp-2.

Выводы. Для обеспечения качества взаимодействия клинико-диагностических и иммунологических лабораторий с клиническими подразделениями ЛПУ необходимо внедрение в практику унифицированного отчета о результатах исследования АНА методом НРИФHЕp-2, разработанного на основе современных клинических рекомендаций и межлабораторного консенсуса.

1. Александрова Е. Н., Новиков А. А., Насонов Е. Л. Лабораторная диагностика ревматических заболеваний. В кн.: Насонов Е. Л., ред. Российские клинические рекомендации. Ревматология. М.: ГЭОТАР-Медиа; 2019: 302–320.

2. Agmon-Levin N, Damoiseaux J, Kallenberg C, Sack U, Witte T, Herold M. et al. International recommendations for the assessment of autoantibodies to cellular antigens referred to as anti-nuclear antibodies. Ann Rheum Dis. 2014; 73 (1): 17–23.

3. Mahler M, Meroni PL, Bossuyt X, Fritzler MJ. Current concepts and future directions for the assessment of autoantibodies to cellular antigens referred to as anti-nuclear antibodies. J Immunol Res. 2014; 2014: 315179.

4. Meroni PL, Biggioggero M, Pierangeli SS, Sheldon J, Zegers I, Borghi MO. Standardization of autoantibody testing: a paradigm for serology in rheumatic diseases. Nat Rev Rheumatol. 2014; 10 (1): 35–43.

5. Tozzoli R, Bonaguri C, Melegari A, Antico A, Bassetti D, Bizzaro N. Current state of diagnostic technologies in the autoimmunology laboratory. Clin Chem Lab Med. 2013; 51: 129–138.

6. Damoiseaux J, Andrade LEC, Carballo OG, Conrad K, Francescantonio PLC, Fritzler MJ., et al. Clinical relevance of HEp-2 indirect immunofluorescent patterns: the International Consensus on ANA patterns (ICAP) perspective. Ann Rheum Dis. 2019; 78 (7): 879–889. DOI: 10.1136/annrheumdis-2018–214436.

7. Solomon DH, Kavanaugh AJ, Schur PH. American College of Rheumatology Ad Hoc Committee on Immunologic Testing Guidelines. Evidence-based guidelines for the use of immunologic tests: antinuclear antibody testing. Arthritis Rheum. 2002; 47 (4): 434–44.

8. Александрова Е. Н., Новиков А. А., Верижникова Ж. Г., Лукина Г. В. Современный взгляд на проблемы исследования антинуклеарных антител при системной красной волчанке (обзор литературы). Клиническая лабораторная диагностика. 2018; 63 (6): 340–348. http://dx.doi.org/10.18821/0869–2084–2018–63–6–340–348.

9. Willitzki A, Hiemann R, Peters V, Sack U, Schierack P, Rödiger S. et al. New platform technology for comprehensive serological diagnostics of autoimmune diseases. Clin Dev Immunol. 2012; 2012: 284740.

10. Chan EKL, von Mühlen CA, Fritzler MJ, Damoiseaux J, Infantino M, Klotz W, Satoh M, Musset L, García-De La Torre I, Carballo OG, Herold M, de Melo Cruvinel W, Mimori T, Andrade LEC; ICAP Committee. The International Consensus on ANA Patterns (ICAP) in 2021-The 6th Workshop and Current Perspectives. J Appl Lab Med. 2022 Jan 5; 7 (1): 322–330. DOI: 10.1093/jalm/jfab140.

11. Ткаченко О. Ю., Лапин С. В., Мазинг А. В., Тотолян А. А. Русскоязычная адаптация международной номенклатуры типов свечения ядра и цитоплазмы клетки (ICAP) для стандартизации выявления антинуклеарного фактора. Медицинская иммунология. 2020; 22 (6): 1195–1214. DOI: 10.15789/1563–0625RVO-2067.

12. von Mühlen CA, Garcia-De La Torre I, Infantino M, Damoiseaux J, Andrade LEC, Carballo OG, Conrad K, Carvalho Francescantonio PL, Fritzler MJ, Herold M, Klotz W, de Melo Cruvinel W, Mimori T, Satoh M, Musset L, Chan EKL. How to report the antinuclear antibodies (anti-cell antibodies) test on HEp-2 cells: guidelines from the ICAP initiative. Immunol Res. 2021; 69 (6): 594–608. DOI: 10.1007/s12026–021–09233–0.

13. Tan EM, Feltkamp TE, Smolen JS, Butcher B, Dawkins R, Fritzler MJ, Gordon T, Hardin JA, Kalden JR, Lahita RG, Maini RN, McDougal JS, Rothfield NF, Smeenk RJ, Takasaki Y, Wiik A, Wilson MR, Koziol JA. Range of antinuclear antibodies in «healthy» individuals. Arthritis Rheum. 1997; 40 (9): 1601–11. DOI: 10.1002/art.1780400909.