medalphabetМедицинский алфавитMedical alphabet2078-56312949-2807ООО «Альфмед»10.33667/2078-5631-2023-4-30-33medalphabet-3034Research ArticleСтатьиАлгоритм отбора образцов для гено- и субтипирования вируса гепатита В с помощью панели моноклональных антител в иммуноферментном анализеSampling algorithm for geno- and subtyping of hepatitis B virus using panel of monoclonal antibodies in enzyme immunoassayhttps://orcid.org/0000-0001-9527-8870БезугловаЛ. В.BezuglovaL. V.

Безуглова Людмила Вячеславовна, нач. отделения ИФА гепатита В

Новосибирская область, р. п. Кольцово

Bezuglova Lyudmila V., chief of IFA of Hepatitis B Dept

Koltsovo, Novosibirsk Region

bezuglova@vector-best.ruhttps://orcid.org/0000-0001-7441-2559ПотаповаА. А.PotapovaA. A.

Потапова Александра Анатольевна, д. б. н., доцент кафедры биологии им. академика В. Н. Ярыгина

Москва

Potapova Aleksandra A., DBio Sci (habil.), associate professor at Dept of Biology n. a. academician V. N. Yarygin

Moscow

aapotapova@mail.ruhttps://orcid.org/0000-0002-1953-5123НетесоваИ. Г.NetesovaI. G.

Нетесова Ирина Григорьевна, к. б. н., научный консультант отделения ИФА гепатита В

Новосибирская область, р. п. Кольцово

Netesova Irina G., PhD Bio, scientific consultant at IFA of Hepatitis B Dept

Koltsovo, Novosibirsk Region

irina_netesova@hotmail.comАО «Вектор-Бест»РоссияVector-Best Co.Russian FederationФГАОУ ВО «Российский национальный исследовательский медицинский университет имени Н. И. Пирогова» Минздрава РоссииРоссияRussian National Research Medical University n. a. N. I. PirogovRussian Federation20233003202304Современная лаборатория (1)3033Copyright © Безуглова Л.В., Потапова А.А., Нетесова И.Г., 20232023Безуглова Л.В., Потапова А.А., Нетесова И.Г.Bezuglova L.V., Potapova A.A., Netesova I.G.Данная работа распространяется под лицензией Creative Commons Attribution 4.0.This work is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 License.https://www.med-alphabet.com/jour/article/view/3034Введение

Введение. Ранее была описана отечественная методика определения генотипов вируса гепатита В (ВГВ) и субтипов поверхностного антигенаВГВ (HBsAg) в HBsAg-положительных образцах сыворотки крови с панелью моноклональных антител (МАТ) методом иммуноферментногоанализа (ИФА). В рутинной лабораторной практике результаты выявления HBsAg получают в единицах оптической плотности (ОП).

Цель работы

Цель работы. Описать алгоритм отбора образцов для иммуноферментного гено- и субтипирования ВГВ с панелью МАТ.Материалы и методы. В работе исследовали 40 образцов сыворотки крови с положительными результатами определения HBsAg. Генотипы ВГВи субтипы HBsAg устанавливали с помощью четырех различных конъюгатов МАТ с пероксидазой хрена по методике ИФА, описанной ранее.

Результаты и обсуждение

Результаты и обсуждение. В образцах с ОП менее 2,0 о. е. и подтверждением наличия HBsAg после единственного подтверждающегоисследования (n = 19) генотипы ВГВ / субтипы HBsAg не установлены. В образцах с ОП выше 2,0 о. е. и верификацией наличия антигена пристандартном режиме регистрации (n = 15) иммуноферментное гено- и субтипирование ВГВ оказалось эффективным в 27 % случаев (4/15); для образцов с верификацией HBsAg, проведенной при вспомогательном измерении (n = 6), эффективность методики составила 100 %. С помощью панели МАТ в ИФА изучены характеристики ВГВ 10 образцов с наличием HBsAg: генотип D ВГВ (n = 10), субтипы ayw2 (n = 7), ayw3 (n = 3).

Выводы

Выводы. Для наиболее эффективного применения методики гено- и субтипирования ВГВ с помощью панели МАТ в ИФА следуетиспользовать образцы HBsAg+ с ОП более 2,0 о. е. в скрининге и верификацией наличия антигена при вспомогательном режимерегистрации результатов.

Introduction

Introduction. Previously, a domestic method for determining hepatitis B virus (HBV) genotypes and HBV surface antigen (HBsAg) subtypes in HBsAgpositive blood serum samples with a Monoclonal Antibody Panel (MAB) by enzyme immunoassay (ELISA) was described. In routine laboratory practice, HBsAg detection results are obtained in units of optical density (OD).

Purpose

Purpose. To describe the sampling algorithm for ELISA geno- and subtyping of HBV with the MAB Panel.

Materials and methods

Materials and methods. We studied 40 blood serum samples with positive results of HBsAg determination. HBV genotypes and HBsAg subtypes were determined using four different MAB conjugates with horseradish peroxidase using the ELISA method described previously.

Results

Results. In samples with OD less than 2.0 o. u. and confirmation of HBsAg after a single confirmatory study (n = 19) HBV genotypes/ HBsAg subtypes not established. In samples with an OD above 2.0 o. u. and verification of the presence of the antigen in the standard mode of registration (n = 15), immunoenzymatic geno- and subtyping of HBV was effective in 27 % of cases (4/15); for samples with HBsAg verification carried out in an auxiliary measurement (n = 6) the effectiveness of the technique was 100 %. Using the MAB panel in ELISA, the characteristics of HBV in 10 samples with the presence of HBsAg were studied: HBV genotype D (n = 10), subtypes ayw2 (n = 7), ayw3 (n = 3).

Conclusions

Conclusions. For the most effective application of the HBV geno- and subtyping technique using the MAB Panel in ELISA, HBsAg+ samples with OD signals of more than 2.0 o. u. in screening and verification of the presence of an antigen in the auxiliary mode of registration of results should be used.

оптическая плотностьповерхностный антиген вируса гепатита Bвирус гепатита Bсубтипгенотипмоноклональные антителаиммуноферментный анализoptical densityhepatitis B virus surface antigenhepatitis B virussubtypegenotypemonoclonal antibodiesenzyme-linked immunosorbent assayReferencesKramvis A. Genotypes and genetic variability of hepatitis B virus. Intervirology. 2014; 57 (3–4): 141–150. https://doi.org/10.1159/000360947Kramvis A. Genotypes and genetic variability of hepatitis B virus. Intervirology. 2014; 57 (3–4): 141–150. https://doi.org/10.1159/000360947Lin C–L, Kao J-H. Hepatitis B virus genotypes and variants. Cold Spring Harbor Perspectives in Medicine. 2015; 5 (5): a021436. https://doi.org/10.1101/cshperspect.a021436Lin C–L, Kao J-H. Hepatitis B virus genotypes and variants. Cold Spring Harbor Perspectives in Medicine. 2015; 5 (5): a021436. https://doi.org/10.1101/cshperspect.a021436Liu Z, Zhang Y, Xu M, Li X, Zhang Z. Distribution of hepatitis B virus genotypes and subgenotypes: A meta-analysis. Medicine (Baltimore). 2021; 100 (50): e27941. https://doi.org/10.1097/MD.0000000000027941Liu Z, Zhang Y, Xu M, Li X, Zhang Z. Distribution of hepatitis B virus genotypes and subgenotypes: A meta-analysis. Medicine (Baltimore). 2021; 100 (50): e27941. https://doi.org/10.1097/MD.0000000000027941Couroucé-Pauty A.M., Plançon A., Soulier J.P. Distribution of HBsAg subtypes in the world. Vox Sanguins. 1983; 44 (4): 197–211. https://doi.org/10.1111/j.1423–0410.1983.tb01885.xCouroucé-Pauty A.M., Plançon A., Soulier J.P. Distribution of HBsAg subtypes in the world. Vox Sanguins. 1983; 44 (4): 197–211. https://doi.org/10.1111/j.1423–0410.1983.tb01885.xMagnius LO, Norder H. Subtypes, Genotypes and Molecular Epidemiology of the Hepatitis B Virus as Reflected by Sequence Variability of the S-Gene. Intervirology. 1995; 38: 24–34. https://doi.org/10.1159/000150411Magnius LO, Norder H. Subtypes, Genotypes and Molecular Epidemiology of the Hepatitis B Virus as Reflected by Sequence Variability of the S-Gene. Intervirology. 1995; 38: 24–34. https://doi.org/10.1159/000150411Valsamakis A. Molecular testing in the diagnosis and management of chronic hepatitis B. Clin Microbiol Rev. 2007; 20 (3): 426–39. https://doi.org/10.1128/CMR.00009–07Valsamakis A. Molecular testing in the diagnosis and management of chronic hepatitis B. Clin Microbiol Rev. 2007; 20 (3): 426–39. https://doi.org/10.1128/CMR.00009–07Безуглова Л.В., Мануйлов В.А., Осипова Л.П., Мосина Я.Д., Порываева В.А., Агафонова О.А., Могильных А.К., Нетесов С.В., Нетесова И. Г. Результаты испытаний реагентов для иммуноферментного определения субтипа HBsAg и генотипа вируса гепатита B в образцах плазмы крови человека. Молекулярная генетика, микробиология и вирусология. 2020; 38 (4): 188–195. https://doi.org/10.17116/molgen2020380411884Bezuglova L.V., Manuilov V.A., Osipova L.P., Mosina Ya.D., Poryvaeva V.A., Agafonova O.A., Mogilnykh A.K., Netesov S.V., Netesova I.G. Results of tests of reagents for enzyme immunoassay for determiMicrobiology and Virology. 2020; 38 (4): 188–195.Безуглова Л.В., Исаева О.В., Карлсен А.А., Ильченко Л.Ю., Слепцова С.С., Сарыглар А.А., Порываева В.А., Мосина Я.Д., Агафонова О.А., Могильных А.К., Кюрегян К.К., Михайлов М.И., Нетесов С.В., Нетесова И.Г. Генотипы вируса гепатита В у пациентов с гепатитом D, определенные с помощью панели моноклональных антител собственной разработки. Молекулярная генетика, микробиология и вирусология. 2022; 40 (2): 43–50. https://doi.org/10.17116/molgen20224002143Bezuglova L.V., Isaeva O.V., Carlsen A.A., Ilchenko L. Yu., Sleptsova S.S., Saryglar A.A., Poryvaeva V.A., Mosina Ya.D., Agafonova O.A., Mogilnykh A.K., Kyuregyan K.K., Mikhailov M.I., Netesov S.V., Netesova I.G. Hepatitis B virus genotypes in patients with hepatitis D, determined using a panel of monoclonal antibodies of our own design. Molecular genetics, microbiology and virology. 2022; 40 (2): 43–50. https://doi.org/10.17116/molgen20224002143О применении в практике здравоохранения иммуноферментных тест-систем для выявления поверхностного антигена вируса гепатита В (HBsAg) и антител к вирусу гепатита С (анти-ВГС) в сыворотке крови человека. Приказ министерства здравоохранения РФ № 322 от 21 октября 2002 года. Ссылка активна на 13.07.22. https://docs.cntd.ru/document/901832500On the use of enzyme immunoassay test systems in healthcare practice to detect hepatitis B surface antigen (HBsAg) and antibodies to hepatitis C virus (anti-HCV) in human blood serum. Order of the Ministry of Health of the Russian Federation No. 322 dated October 21, 2002. The link is active on 07/13/22. https://docs.cntd.ru/document/901832500Нетесова И. Г., Ярославцева О. А., Цой Л. В., Жуков В. А., Нетесов С. В. Результаты участия 360 лабораторий России в Программе внешней оценки качества исследований HBsAg. Клин. Лаб. Диагн. 2007; 3: 47–49.Netesova I.G., Yaroslavtseva O.A., Tsoy L.V., Zhukov V.A., Netesov S.V. Results of the participation of 360 laboratories in Russia in the Program for external quality assessment of HBsAg research. Clin. Lab. Diagn. 2007; 3: 47–49.Шульгина М.М., Ермолаева М.И., Ефремова Е.В., Потапова А.А. Проблемы массового скрининга HBsAg и пути их решения. Медицинский алфавит. 2018; 1 (5): 26–30.Shulgina M.M., Ermolaeva M.I., Efremova E.V., Potapova A.A. Problems of mass screening of HBsAg and ways to solve them. Medical Alphabet. 2018; 1 (5): 26–30.Tallo T, Tefanova V, Priimagi L, Schmidt J, Katargina O, Michailov M. et al. D2: Major subgenotype of hepatitis B virus in Russia and the Baltic region. J General Virology. 2008; 89: 1829–1839. https://doi.org/10.1099/vir.0.83660–0Tallo T, Tefanova V, Priimagi L, Schmidt J, Katargina O, Michailov M. et al. D2: Major subgenotype of hepatitis B virus in Russia and the Baltic region. J General Virology. 2008; 89: 1829–1839. https://doi.org/10.1099/vir.0.83660–0Olinger CM, Lazouskaya NV, Eremin VF, Muller CP. Multiple genotypes and subtypes of hepatitis B and C viruses in Belarus: similarities with Russia and western European influences. Clinical Microbiology and Infection. 2008; 14 (6): 575–581. https://doi.org/10.1111/j.1469–0691.2008.01988.xOlinger CM, Lazouskaya NV, Eremin VF, Muller CP. Multiple genotypes and subtypes of hepatitis B and C viruses in Belarus: similarities with Russia and western European influences. Clinical Microbiology and Infection. 2008; 14 (6): 575–581. https://doi.org/10.1111/j.1469–0691.2008.01988.xМануйлов В.А., Осипова Л.П., Нетесова И.Г., Чуб Е.В., Безуглова Л.В., Norder H. и др. Распространенность различных генотипов и субтипов HBs-антигена вируса гепатита B в группах коренного населения Сибири. Молекулярная генетика, микробиология и вирусология. 2015; 1: 28–35. https://doi.org/10.3103/S089141681501005XManuylov V. A., Osipova L. P., Netesova I. G., Chub E. V., Bezuglova L. V., Norder H. et al. population of Siberia. Molecular genetics, microbiology and virology. 2015; 1: 28–35. https://doi.org/10.3103/S089141681501005XСероварианты HBsAg и эволюция тестов для его выявления. https://www.fedlab.ru/upload/medialibrary/3e9/mostovich-la-_-serovarianty-hbsag-.-22-okt-2015-khmao.pdf. Ссылка активна на13.07.2022.Serovariants of HBsAg and the evolution of tests for its detection. https://www.fedlab.ru/upload/medialibrary/3e9/mostovich-la-_-serovarianty-hbsag-.-22-okt-2015-khmao.pdf. The link is active on 07/13/2022.

The authors declare that there are no conflicts of interest present.