medalphabetМедицинский алфавитMedical alphabet2078-56312949-2807ООО «Альфмед»10.33667/2078-5631-2022-29-36-40medalphabet-2901Research ArticleСтатьиАктуальные вопросы стандартизации исследования антинуклеарных антител методом непрямой иммунофлюоресценции на HEp-2 – клеткахCurrent issues of standardization of antinuclear antibodies’ detection by indirect immunofluorescence on HEp-2 cellshttps://orcid.org/0000-0002-2738-2956АлександроваЕ. Н.AleksandrovaE. N.

Александрова Елена Николаевна - доктор медицинских наук, заведующий лабораторией клинической иммунологии.

Москва

Alexandrova Elena N. - DM Sci (habil.), head of Laboratory of Clinical Immunology.

Moscow

aleksandrovaen2015@yandex.ruhttps://orcid.org/0000-0002-2738-2956НовиковА. А.NovikovA. A.

Казаков Сергей Петрович - доктор медицинских наук, доцент, начальник центра клинической лабораторной диагностики – главный лаборант госпиталя2, заведующий кафедрой медицинской биохимии и иммунопатологии3.

Москва

Novikov Alexander A. - DBio Sci (habil.), leading researcher at Laboratory of Clinical Immunology.

Moscow

КазаковС. П.KazakovS. P.

Казаков Сергей Петрович - доктор медицинских наук, доцент, начальник центра клинической лабораторной диагностики – главный лаборант госпиталя2, заведующий кафедрой медицинской биохимии и иммунопатологии3.

Москва

Kazakov Sergey P. - DM Sci (habil.), associate professor, head of Centre for Clinical Laboratory Diagnostics – chief laboratory assistant, head of Dept of Medical Biochemistry and Immunopathology.

Moscow

https://orcid.org/0000-0002-6471-9415КлюквинаН. Г.KlyukvinaN. G.

Клюквина Наталия Геннадьевна - доктор медицинских наук, врач-ревматолог.

Москва

Klyukvina Natalia G. - DM Sci (habil.), rheumatologist.

Moscow

https://orcid.org/0000-0002-1425-8622ВасильевВ. И.VasilievV. I.

Васильев Владимир Иванович - доктор медицинских наук, профессор, врач-ревматолог.

Москва

Vasiliev Vladimir I. - DM Sci (habil.), professor, rheumatologist.

Moscow

https://orcid.org/0000-0001-7958-5926ЛукинаГ. В.LukinaG. V.

Лукина Галина Викторовна - доктор медицинских наук, профессор, заведующий отделом ревматологии, ведущий научный сотрудник лаборатории эволюции ревматоидного артрита.

Москва

Lukina Galina Viktorovna - DM Sci (habil.), professor, head of Dept of Rheumatology, leading researcher at Laboratory of the Evolution of Rheumatoid Arthritis.

Moscow

ГБУЗ Московский клинический научно-практический центр имени А.С. Логинова, Департамент здравоохранения города МосквыРоссияA.S. Loginov Moscow Clinical Scientific CenterRussian FederationФГБУ Главный военный клинический госпиталь имени академика Н.Н. Бурденко Минобороны России; ФГБОУ ДПО Российская медицинская академия непрерывного профессионального образования Минздрава РоссииРоссияMain Military Clinical Hospital n. a. academician N.N. Burdenko of the Ministry of Defense of Russia; Russian Medical Academy for Continuing Professional EducationRussian FederationРевмоцентр, ОООРоссияRevmocentre Co.Russian FederationГБУЗ Московский клинический научно-практический центр имени А.С. Логинова, Департамент здравоохранения города Москвы; ФГБНУ Научно-исследовательский институт ревматологии имени В.А. НасоновойРоссияA.S. Loginov Moscow Clinical Scientific Center; V.A. Nasonova Research Institute of RheumatologyRussian Federation202225122022029Ревматология в общей врачебной практике (2)3640Copyright © Александрова Е.Н., Новиков А.А., Казаков С.П., Клюквина Н.Г., Васильев В.И., Лукина Г.В., 20222022Александрова Е.Н., Новиков А.А., Казаков С.П., Клюквина Н.Г., Васильев В.И., Лукина Г.В.Aleksandrova E.N., Novikov A.A., Kazakov S.P., Klyukvina N.G., Vasiliev V.I., Lukina G.V.Данная работа распространяется под лицензией Creative Commons Attribution 4.0.This work is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 License.https://www.med-alphabet.com/jour/article/view/2901Введение

Введение. Антинуклеарные антитела (АНА) – гетерогенная группа органонеспецифических аутоантител к различным компонентам клеточного ядра и цитоплазмы. Исследование АНА в сыворотке крови с помощью непрямой реакции иммунофлюоресценции на HEp-2 клетках (НРИФ-HEp-2) служит эталонным скрининговым тестом для диагностики системных аутоиммунных ревматических заболеваний, лекарственной волчанки, аутоиммунных заболеваний печени, ювенильного хронического артрита. В повседневной клинико-лабораторной практике остаются нерешенными вопросы стандартизации НРИФ-HEp-2, связанные с разработкой унифицированной формы отчета о результатах определения АНА данным методом, в том числе касающиеся оценки скрининговых и конечных титров АНА, кодировки типов свечения, порядка выполнения подтверждающих тестов. Цель исследования. Разработать стандартную форму отчета о результатах исследования АНА методом НРИФ-HЕp-2.

Материал и методы

Материал и методы. Анкетирование 10 иммунологических и клинико-диагностических лабораторий с использованием опросника ICAP, адаптированного рабочей группой по стандартизации определения АНА методом НРИФ-HЕp-2 комитета по иммунологии ассоциации специалистов и организаций лабораторной службы «Федерация лабораторной медицины».

Результаты

Результаты. Согласно результатам анкетирования 10 отечественных иммунологических и клинико-диагностических лабораторий по девяти актуальным вопросам, касающимся стандартизации отчета о результатах исследования АНА методом НРИФ-HЕp-2, большинство участников опроса: используют скрининговое разведение сыворотки 1:160; указывают максимальный конечный титр АНФ; учитывают цитоплазматические типы свечения в качестве положительных или отрицательных результатов определения АНА в НРИФ-HEp-2; идентифицируют типы свечения, включая использование АС-кодировки; считают обязательным проведение подтверждающих тестов для выявления АНА к отдельным ядерным антигенам у АНФ-положительных пациентов, но не представляют перечень данных исследований в бланке выдачи результатов; регистрируют титры АНФ для каждого из обнаруженных типов свечения отдельно; обозначают титры АНФ с помощью двоеточия; не дают клинической интерпретации полученных данных. На основе межлабораторного консенсуса с учетом рекомендаций ICAP и требований ГОСТ Р ИСО 15189–2015 разработана модель унифицированного отчета о результатах исследования АНА методом НРИФ-HЕp-2.

Выводы

Выводы. Для обеспечения качества взаимодействия клинико-диагностических и иммунологических лабораторий с клиническими подразделениями ЛПУ необходимо внедрение в практику унифицированного отчета о результатах исследования АНА методом НРИФHЕp-2, разработанного на основе современных клинических рекомендаций и межлабораторного консенсуса.

Background

Background. Antinuclear antibodies (ANA) are a group of antibodies that target nuclear and cytoplasmic antigens. Testing for ANA using an immunofluorescence assay (IFA) on HЕp-2 cell (IFA-HEp-2) is a screening test for the diagnosis of systemic autoimmune rheumatic diseases, druginduced lupus erythematosus, autoimmune liver diseases, juvenile idiopathic arthritis. In routine ANA testing final report forms bears important, but unstandardized variables (e. g., screening and final titers of ANA, coding of glow types, the procedure for performing confirmatory tests). Aim of the study. Develop a standard report form for IFA-HEp-2 testing results.

Material and methods

Material and methods. Survey of 10 immunological and clinical diagnostic laboratories using the ICAP questionnaire adapted by the Working Group on Standardization of the definition of ANA by the IFA-HEp-2 method (Committee on Immunology of the Association ‘Federation of Laboratory Medicine’).

Results

Results. According to the results of a survey: most of the participants use a screening dilution of serum 1:160; indicates the maximum end titer of antinuclear factor (ANF), cytoplasmic staining; identifies staining types (including AC encoding); considers it mandatory to make confirmatory tests to detect ANA to individual nuclear antigens in ANF-positive patients, but does not provide a list of this tests in the results form; describes ANF titer for each of the detected glows separately; designates ANF titers using a colon and does not give a clinical interpretation of the results. Based on interlaboratory consensus, ICAP recommendations and the requirements of ISO 15189, the standard report form for IFA-HEp-2 testing results was developed.

Conclusions

Conclusions. To achieve high quality of interaction between clinical diagnostic/immunological laboratories and clinical departments of health care facilities, it’s necessary to introduce into practice a standard form for IFA-HEp-2 testing results, developed relying on modern clinical recommendations and interlaboratory consensus.

антинуклеарные антителанепрямая реакция иммунофлюоресценцииHEp-2 – клеткититрытипы свеченияноменклатураподтверждающие тестыотчет о результатах исследованиястандартизацияantinuclear antibodiesindirect immunofluorescence assayHEp-2 cellstitersimmunofluorescence patternsnomenclatureconfirmatory teststest results reportstandardizationReferencesАлександрова Е. Н., Новиков А. А., Насонов Е. Л. Лабораторная диагностика ревматических заболеваний. В кн.: Насонов Е. Л., ред. Российские клинические рекомендации. Ревматология. М.: ГЭОТАР-Медиа; 2019: 302–320.Aleksandrova EN, Novikov AA, Nasonov EL. Laboratory diagnosis of rheumatic diseases. In Nasonov E. L., ed. Russian Clinical Guidelines. Rheumatology. [Rossiyskie Klinicheskie Rekomendatsii. Revmatologiya.]. Moscow: GEOTAR-Media; 2019: 302–320 (in Russian).Agmon-Levin N, Damoiseaux J, Kallenberg C, Sack U, Witte T, Herold M. et al. International recommendations for the assessment of autoantibodies to cellular antigens referred to as anti-nuclear antibodies. Ann Rheum Dis. 2014; 73 (1): 17–23.Agmon-Levin N, Damoiseaux J, Kallenberg C, Sack U, Witte T, Herold M. et al. International recommendations for the assessment of autoantibodies to cellular antigens referred to as anti-nuclear antibodies. Ann Rheum Dis. 2014; 73 (1): 17–23.Mahler M, Meroni PL, Bossuyt X, Fritzler MJ. Current concepts and future directions for the assessment of autoantibodies to cellular antigens referred to as anti-nuclear antibodies. J Immunol Res. 2014; 2014: 315179.Mahler M, Meroni PL, Bossuyt X, Fritzler MJ. Current concepts and future directions for the assessment of autoantibodies to cellular antigens referred to as anti-nuclear antibodies. J Immunol Res. 2014; 2014: 315179.Meroni PL, Biggioggero M, Pierangeli SS, Sheldon J, Zegers I, Borghi MO. Standardization of autoantibody testing: a paradigm for serology in rheumatic diseases. Nat Rev Rheumatol. 2014; 10 (1): 35–43.Meroni PL, Biggioggero M, Pierangeli SS, Sheldon J, Zegers I, Borghi MO. Standardization of autoantibody testing: a paradigm for serology in rheumatic diseases. Nat Rev Rheumatol. 2014; 10 (1): 35–43.Tozzoli R, Bonaguri C, Melegari A, Antico A, Bassetti D, Bizzaro N. Current state of diagnostic technologies in the autoimmunology laboratory. Clin Chem Lab Med. 2013; 51: 129–138.Tozzoli R, Bonaguri C, Melegari A, Antico A, Bassetti D, Bizzaro N. Current state of diagnostic technologies in the autoimmunology laboratory. Clin Chem Lab Med. 2013; 51: 129–138.Damoiseaux J, Andrade LEC, Carballo OG, Conrad K, Francescantonio PLC, Fritzler MJ., et al. Clinical relevance of HEp-2 indirect immunofluorescent patterns: the International Consensus on ANA patterns (ICAP) perspective. Ann Rheum Dis. 2019; 78 (7): 879–889. DOI: 10.1136/annrheumdis-2018–214436.Damoiseaux J, Andrade LEC, Carballo OG, Conrad K, Francescantonio PLC, Fritzler MJ., et al. Clinical relevance of HEp-2 indirect immunofluorescent patterns: the International Consensus on ANA patterns (ICAP) perspective. Ann Rheum Dis. 2019; 78 (7): 879–889. DOI: 10.1136/annrheumdis-2018–214436.Solomon DH, Kavanaugh AJ, Schur PH. American College of Rheumatology Ad Hoc Committee on Immunologic Testing Guidelines. Evidence-based guidelines for the use of immunologic tests: antinuclear antibody testing. Arthritis Rheum. 2002; 47 (4): 434–44.Solomon DH, Kavanaugh AJ, Schur PH. American College of Rheumatology Ad Hoc Committee on Immunologic Testing Guidelines. Evidence-based guidelines for the use of immunologic tests: antinuclear antibody testing. Arthritis Rheum. 2002; 47 (4): 434–44.Александрова Е. Н., Новиков А. А., Верижникова Ж. Г., Лукина Г. В. Современный взгляд на проблемы исследования антинуклеарных антител при системной красной волчанке (обзор литературы). Клиническая лабораторная диагностика. 2018; 63 (6): 340–348. http://dx.doi.org/10.18821/0869–2084–2018–63–6–340–348.Aleksandrova EN, Verizhnikova ZhG, Novikov AA, Lukina GV. Modern look at the problems of investigation of anti-nuclear antibodies in systemic lupus erythematosus (literature review). Clinical Laboratory Diagnostics. 2018; 63 (6): 340–348. (In Russ.) http://dx.doi.org/10.18821/0869–2084–2018–63–6–340–348.Willitzki A, Hiemann R, Peters V, Sack U, Schierack P, Rödiger S. et al. New platform technology for comprehensive serological diagnostics of autoimmune diseases. Clin Dev Immunol. 2012; 2012: 284740.Willitzki A, Hiemann R, Peters V, Sack U, Schierack P, Rödiger S. et al. New platform technology for comprehensive serological diagnostics of autoimmune diseases. Clin Dev Immunol. 2012; 2012: 284740.Chan EKL, von Mühlen CA, Fritzler MJ, Damoiseaux J, Infantino M, Klotz W, Satoh M, Musset L, García-De La Torre I, Carballo OG, Herold M, de Melo Cruvinel W, Mimori T, Andrade LEC; ICAP Committee. The International Consensus on ANA Patterns (ICAP) in 2021-The 6th Workshop and Current Perspectives. J Appl Lab Med. 2022 Jan 5; 7 (1): 322–330. DOI: 10.1093/jalm/jfab140.Chan EKL, von Mühlen CA, Fritzler MJ, Damoiseaux J, Infantino M, Klotz W, Satoh M, Musset L, García-De La Torre I, Carballo OG, Herold M, de Melo Cruvinel W, Mimori T, Andrade LEC; ICAP Committee. The International Consensus on ANA Patterns (ICAP) in 2021-The 6th Workshop and Current Perspectives. J Appl Lab Med. 2022 Jan 5; 7 (1): 322–330. DOI: 10.1093/jalm/jfab140.Ткаченко О. Ю., Лапин С. В., Мазинг А. В., Тотолян А. А. Русскоязычная адаптация международной номенклатуры типов свечения ядра и цитоплазмы клетки (ICAP) для стандартизации выявления антинуклеарного фактора. Медицинская иммунология. 2020; 22 (6): 1195–1214. DOI: 10.15789/1563–0625RVO-2067.Tkachenko O. Yu., Lapin S. V., Mazing A. V., Totolian A. A. Russian-language version of the International Nomenclature of International Consensus on Antinuclear Antibody (ANA) Patterns (ICAP). medical Immunology. 2020; 22 (6): 1195–1214. (In Russ.) DOI: 10.15789/1563–0625-RVO-2067.von Mühlen CA, Garcia-De La Torre I, Infantino M, Damoiseaux J, Andrade LEC, Carballo OG, Conrad K, Carvalho Francescantonio PL, Fritzler MJ, Herold M, Klotz W, de Melo Cruvinel W, Mimori T, Satoh M, Musset L, Chan EKL. How to report the antinuclear antibodies (anti-cell antibodies) test on HEp-2 cells: guidelines from the ICAP initiative. Immunol Res. 2021; 69 (6): 594–608. DOI: 10.1007/s12026–021–09233–0.von Mühlen CA, Garcia-De La Torre I, Infantino M, Damoiseaux J, Andrade LEC, Carballo OG, Conrad K, Carvalho Francescantonio PL, Fritzler MJ, Herold M, Klotz W, de Melo Cruvinel W, Mimori T, Satoh M, Musset L, Chan EKL. How to report the antinuclear antibodies (anti-cell antibodies) test on HEp-2 cells: guidelines from the ICAP initiative. Immunol Res. 2021; 69 (6): 594–608. DOI: 10.1007/s12026–021–09233–0.Tan EM, Feltkamp TE, Smolen JS, Butcher B, Dawkins R, Fritzler MJ, Gordon T, Hardin JA, Kalden JR, Lahita RG, Maini RN, McDougal JS, Rothfield NF, Smeenk RJ, Takasaki Y, Wiik A, Wilson MR, Koziol JA. Range of antinuclear antibodies in «healthy» individuals. Arthritis Rheum. 1997; 40 (9): 1601–11. DOI: 10.1002/art.1780400909.Tan EM, Feltkamp TE, Smolen JS, Butcher B, Dawkins R, Fritzler MJ, Gordon T, Hardin JA, Kalden JR, Lahita RG, Maini RN, McDougal JS, Rothfield NF, Smeenk RJ, Takasaki Y, Wiik A, Wilson MR, Koziol JA. Range of antinuclear antibodies in «healthy» individuals. Arthritis Rheum. 1997; 40 (9): 1601–11. DOI: 10.1002/art.1780400909.

The authors declare that there are no conflicts of interest present.