medalphabetМедицинский алфавитMedical alphabet2078-56312949-2807ООО «Альфмед»10.33667/2078-5631-2020-5-19-24medalphabet-1460Research ArticleСтатьиОрфанный рецептор ROR1 для детекции минимальной остаточной болезни при хроническом лимфолейкозеOrphan receptor ROR1 for detection of minimal residual disease in chronic lymphocytic leukemiaМиролюбоваЮ. В.MirolyubovaYu. V.

врач клинической лабораторной диагностики, ассистент кафедры лабораторной медицины и генетики

г. Санкт-Петербург

Saint Petersburg

ТимофееваН. С.TimofeevaN. S.

врач-гематолог

г. Санкт-Петербург

Saint Petersburg

БартВ. А.BartV. A.

к. ф.- м. н., в. н. с. НИЛ биостатистики

г. Санкт-Петербург

Saint Petersburg

ТолстопятоваЕ. В.SolovyovV. M.

врач клинической лабораторной диагностики

г. Санкт-Петербург

Saint Petersburg

ФетисовЕ. С.TolstopyatovaE. V.

врач клинической лабораторной диагностики

г. Санкт-Петербург

Saint Petersburg

СтруговВ. В.FetisovE. S.

врач-гематолог

г. Санкт-Петербург

Saint Petersburg

СоловьевВ. М.StrugovV. V.

клинический ординатор кафедры лабораторной медицины и генетики

г. Санкт-Петербург

Saint Petersburg

ЗарицкийА. Ю.ZaritskyA. Yu.

д. м. н. проф., директор института гематологии, г. н. с. НИЛ онкогематологии

г. Санкт-Петербург

Saint Petersburg

ВавиловаТ. В.VavilovaT. V.

д. м. н. проф., зав. кафедрой лабораторной медицины и генетики

г. Санкт-Петербург

Saint Petersburg

ФГБУ «Национальный медицинский исследовательский центр имени В. А. Алмазова» Минздрава РоссииРоссияNational Medical Research Centre n. a. V. A. AlmazovRussian Federation20201506202005Современная лаборатория1924Copyright © Миролюбова Ю.В., Тимофеева Н.С., Барт В.А., Толстопятова Е.В., Фетисов Е.С., Стругов В.В., Соловьев В.М., Зарицкий А.Ю., Вавилова Т.В., 20202020Миролюбова Ю.В., Тимофеева Н.С., Барт В.А., Толстопятова Е.В., Фетисов Е.С., Стругов В.В., Соловьев В.М., Зарицкий А.Ю., Вавилова Т.В.Mirolyubova Y.V., Timofeeva N.S., Bart V.A., Solovyov V.M., Tolstopyatova E.V., Fetisov E.S., Strugov V.V., Zaritsky A.Y., Vavilova T.V.Данная работа распространяется под лицензией Creative Commons Attribution 4.0.This work is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 License.https://www.med-alphabet.com/jour/article/view/1460Актуальность и цели

Актуальность и цели. Детекция минимальной остаточной болезни (МОБ) при хроническом лимфолейкозе (ХЛЛ) методом многоцветной проточной цитометрии нашла широкое применение в клинических исследованиях для оценки эффективности лечения. Метод совершенствуется в направлении поиска наиболее чувствительных и специфичных маркеров для применения в панели для 6–8 цветных цитометров. По литературным данным, ROR1 демонстрирует высокую экспрессию на ХЛЛ-клетках и отсутствие экспрессии на зрелых лимфоцитах, что отличает его от других маркеров, применяющихся для выявления МОБ при ХЛЛ.

Цель исследования

Цель исследования: определение информативности маркера ROR1 в четырехцветной панели для оценки минимальной остаточной болезни при ХЛЛ методом проточной цитометрии.

Материалы и методы

Материалы и методы. Проанализировано 64 образца костного мозга 37 пациентов с верифицированным диагнозом ХЛЛ после 3-го и 6-го курса терапии по схеме «бендамустин + ритуксимаб» (BR) – 15 МОБ-отрицательных и 49 МОБ-положительных. Количественное определение МОБ проводилось стандартизованным методом четырехцветной проточной цитомерии по рекомендациям ERIC (Европейская инициатива по изучению ХЛЛ) с включением в диагностическую панель маркера ROR1. Выполнен дискриминационный анализ дифференцирующих свойств диагностических маркеров с помощью программы Statistica 10.

Результаты

Результаты. ROR1 продемонстрировал высокие дифференцирующие свойства в отношении ХЛЛ-клеток и зрелых лимфоцитов. Во всех проанализированных образцах отмечались яркая мономорфная экспрессия ROR1 на ХЛЛ-клетках и В-клеточных предшественниках и отсутствие его экспрессии на зрелых лимфоцитах.

Выводы

Выводы. ROR1 является высокоспецифичным и чувствительным маркером для выявления ХЛЛ-клеток среди зрелых лимфоцитов. Высокая экспрессия ROR1 на нормальных В-клеточных предшественниках требует применения ROR1 в сочетании с маркером, дифференцирующим ХЛЛ-клетки от клеток-предшественников (CD81).

Background and Aims

Background and Aims. The detection of minimal residual disease (MRD) of chronic lymphocytic leukemia (CLL) using multicolor flow cytometry has been widely used in clinical studies to evaluate the effectiveness of treatment. The method is being improved by searching for the most sensitive and specific markers for use in panels for 6–8 color cytometers. According to published data, ROR1 shows high expression on CLL cells, and lack of expression on mature lymphocytes, which distinguishes it from other markers used to detect MRD in CLL.

Aim

Aim: to determine a significance of ROR1 for detection of MRD CLL by flow cytometry in a 4-color panel.

Materials and Methods

Materials and Methods. We analyzed 64 bone marrow samples of 37 patients with a verified diagnosis of CLL after the 3rd and 6th cycles of therapy according to bendamustine and rituximab (BR) regimen – 15 MRD-negative and 49 MRD-positive. Quantitative determination of MRD was carried out by the standardized method of 4-color flow cytometry according to the recommendations of ERIC (European research initiative on CLL) with the inclusion of ROR1 in the diagnostic panel. A discriminatory analysis of the differentiating properties of diagnostic markers was performed using Statistica 10.

Results

Results. ROR1 has demonstrated high differentiating properties on CLL cells and mature lymphocytes. All the analyzed samples showed a bright monomorphic expression of ROR1 on CLL cells and B-cell precursors, and the absence of its expression on mature lymphocytes.

Conclusion

Conclusion. ROR1 is a highly specific and sensitive marker for the detection of CLL cells among mature lymphocytes. The high expression of ROR1 on normal B-cell precursors requires the use of ROR1 in combination with a marker that differentiates CLL cells from progenitor cells (CD81).

хронический лимфолейкозминимальная остаточная болезньROR1chronic lymphocytic leukemiaminimal residual diseaseROR1ReferencesBaskar S., Kwong K. Y., Hofer T., Levy J. M., Kennedy M. G., Lee E., Staudt L. M., Wilson W. H., Wiestner A. & Rader C. (2008) Unique cell surface expression of receptor tyrosine kinase ROR1 in human B-cell chronic lymphocytic leukemia. Clinical Cancer Research, 14, 396–404.Baskar S., Kwong K. Y., Hofer T., Levy J. M., Kennedy M. G., Lee E., Staudt L. M., Wilson W. H., Wiestner A. & Rader C. (2008) Unique cell surface expression of receptor tyrosine kinase ROR1 in human B-cell chronic lymphocytic leukemia. Clinical Cancer Research, 14, 396–404.Broome HE 1, Rassenti LZ, Wang HY, Meyer LM, Kipps TJ. ROR1 is expressed on hematogones (non-neoplastic human B-lymphocyte precursors) and a minority of precursor-B acute lymphoblastic leukemia. Leuk Res. 2011 Oct; 35 (10): 1390–4.Broome HE 1, Rassenti LZ, Wang HY, Meyer LM, Kipps TJ. ROR1 is expressed on hematogones (non-neoplastic human B-lymphocyte precursors) and a minority of precursor-B acute lymphoblastic leukemia. Leuk Res. 2011 Oct; 35 (10): 1390–4.Daneshmanesh AH, Porwit A, Hojjat-Farsangi M, Jeddi-Tehrani M, Tamm KP, Grandér D, Lehmann S, Norin S, Shokri F, Rabbani H, Mellstedt H, Österborg A. Orphan receptor tyrosine kinases ROR1 and ROR2 in hematological malignancies. Leukemia Lymphoma. 2013 Apr; 54 (4): 843–50.Daneshmanesh AH, Porwit A, Hojjat-Farsangi M, Jeddi-Tehrani M, Tamm KP, Grandér D, Lehmann S, Norin S, Shokri F, Rabbani H, Mellstedt H, Österborg A. Orphan receptor tyrosine kinases ROR1 and ROR2 in hematological malignancies. Leukemia Lymphoma. 2013 Apr; 54 (4): 843–50.Farren T. W. Combined ROR1 and CD160 Detection for Improved Minimal Residual Disease in Patients with Chronic Lymphocytic Leukemia (CLL). / Farren TW, Liu F, Macey MG, et al. // Blood. – 2013. – Vol. 22, N 21.Farren T. W. Combined ROR1 and CD160 Detection for Improved Minimal Residual Disease in Patients with Chronic Lymphocytic Leukemia (CLL). / Farren TW, Liu F, Macey MG, et al. // Blood. – 2013. – Vol. 22, N 21.Hallek M. IwCLL guidelines for diagnosis, indications for treatment, response assessment, and supportive management of CLL. /Hallek M, Cheson BD, Catovsky D, et al. // Blood. – 2018. – Vol. 131, N 25. – P. 2745–2760.Hallek M. IwCLL guidelines for diagnosis, indications for treatment, response assessment, and supportive management of CLL. /Hallek M, Cheson BD, Catovsky D, et al. // Blood. – 2018. – Vol. 131, N 25. – P. 2745–2760.Rawstron AC. Reproducible diagnosis of chronic lymphocytic leukemia by flow cytometry: An European Research Initiative on CLL (ERIC) & European Society for Clinical Cell Analysis (ESCCA) Harmonisation project. / Rawstron AC, Kreuzer KA, Soosapilla A. et al. Cytometry B Clin Cytom. – 2018. – Vol. 94, № 1. – P. 121–128.Rawstron AC. Reproducible diagnosis of chronic lymphocytic leukemia by flow cytometry: An European Research Initiative on CLL (ERIC) & European Society for Clinical Cell Analysis (ESCCA) Harmonisation project. / Rawstron AC, Kreuzer KA, Soosapilla A. et al. Cytometry B Clin Cytom. – 2018. – Vol. 94, № 1. – P. 121–128.Rawstron A. C., N. Villamor, M. Ritgen, et al. International standardized approach for flow cytometric residual disease monitoring in chronic lymphocytic leukemia. Leukemia. – 2007. – Vol. 21, N 5. – P. 956–964.Rawstron A. C., N. Villamor, M. Ritgen, et al. International standardized approach for flow cytometric residual disease monitoring in chronic lymphocytic leukemia. Leukemia. – 2007. – Vol. 21, N 5. – P. 956–964.Rawstron AC. A complementary role of multiparameter flow cytometry and high-throughput sequencing for minimal residual disease detection in chronic lymphocytic leukemia: an European Research Initiative on CLL study. / Rawstron AC, Fazi C, Agathangelidis A, et al.// Leukemia. – 2016. – Vol. 30, N 4. – P. 929–936.Rawstron AC. A complementary role of multiparameter flow cytometry and high-throughput sequencing for minimal residual disease detection in chronic lymphocytic leukemia: an European Research Initiative on CLL study. / Rawstron AC, Fazi C, Agathangelidis A, et al.// Leukemia. – 2016. – Vol. 30, N 4. – P. 929–936.Swerdlow SH, Campo E, Harris NL et al. WHO Classification of Tumors of Hematopoietic and Lymphoid Tissues. WHO Press, 2017.Swerdlow SH, Campo E, Harris NL et al. WHO Classification of Tumors of Hematopoietic and Lymphoid Tissues. WHO Press, 2017.Uhrmacher S, Schmidt C, Erdfelder F, Poll-Wolbeck SJ, Gehrke I, Hallek M, Kreuzer KA. Use of the receptor tyrosine kinase-like orphan receptor 1 (ROR1) as a diagnostic tool in chronic lymphocytic leukemia (CLL). Leukemia Research, Vol. 35, Pages 1360–1366.Uhrmacher S, Schmidt C, Erdfelder F, Poll-Wolbeck SJ, Gehrke I, Hallek M, Kreuzer KA. Use of the receptor tyrosine kinase-like orphan receptor 1 (ROR1) as a diagnostic tool in chronic lymphocytic leukemia (CLL). Leukemia Research, Vol. 35, Pages 1360–1366.

The authors declare that there are no conflicts of interest present.